УДК 619:615.099; 619:615.9; 68.39.43
ОЦЕНКА БЕЗВРЕДНОСТИ НОВОЙ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ ДЛЯ ПЧЕЛ ЛОЗЕКОРМ
М.П. СЕМЕНЕНКО1, Ф.Д. ОНИЩУК1, Е.В. КУЗЬМИНОВА1
1ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии»
Выполненные экспериментальные исследования свидетельствуют, что однократное внутрижелудочное введение лабораторным животным образца новой кормовой добавки ЛОЗЕКОРМ ( Свидетельство о Государственной регистрации № ПВР-2-42.20/03595 от 27.X1.2020г. для ООО «Биостим» г. Сочи) в дозах 5,0 мл позволяет отнести ее к 4-му классу опасности – вещества малоопасные (ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества»). Результаты проведенных исследований при длительном внутрижелудочном введении образца кормовой добавки ЛОЗЕКОРМ в дозах, составляющих 1,0 мл, 0,5 мл и 0,25 мл на животное, не выявили его токсического действия. При этом кормовая добавка оказывает опосредованный положительный эффект на ростовые характеристики и ряд биохимических показателей крови лабораторных животных (Отчет о научно-исследовательской работе по изучению безвредности кормовой добавки ЛОЗЕКОРМ для повышения продуктивности и сохранности пчел, ФГБНУ КНЦЗВ ,2018 г.) .
Ключевые слова: кормовая добавка, болезни пчел, безвредность, доклинические исследования, лабораторные животные
Введение. Стремительное развитие фундаментальных наук формирует условия для создания новых фармакологических композиций, способных эффективно влиять на метаболические процессы, рост, развитие, сохранность и продуктивность животных и пчел. Новые источники получения таких средств значительно расширяют также принципиальные возможности фармакотерапии их основных заболеваний . Между тем, внедрение современных препаратов в клиническую практику осуществимо лишь при условии детального изучения их безопасности на этапе экспериментальных исследований для получения научными методами оценок и доказательств их эффективности и безопасности. При этом доклинические исследования должны проводиться в соответствии с международными правилами и только на лабораторных животных (модельных объектах), на которых возможно выявить основные токсикологические характеристики изучаемого средства, а также определить характер и выраженность его повреждающего воздействия на живой организм с последующей оценкой безопасности [1, 2, 3, 5, 8].
В настоящее время все шире внедряются безмедикаментозные способы профилактики и лечения болезней, для получения экологически чистой продукции и повышения иммунитета пчел. С этой целью широко используется хвойный экстракт, способствующий самовыздоровлению семей и их профилактики от многих заболеваний ( 9 ).
В связи с вышесказанным, нами были проведены токсикометрические исследования новой кормовой добавки для пчел ЛОЗЕКОРМ, которая является комплексным препаратом для стимулирования развития, повышения продуктивности, сохранности, а также профилактики вирусных, бактериальных и грибковых болезней пчел, таких как мешотчатый расплод, филаментовироз, гнильцовые заболевания, острый паралич, паратиф и колибактериоз [4, 7].
ЛОЗЕКОРМ представляет собой маслянистую жидкость от желтого до желто-коричневого цвета со специфическим запахом. Ее свойства определяются сложным комплексом биологически активных веществ, входящих в состав хвойного экстракта (в том числе макро- и микроэлементами, азотсодержащими и фенольными соединениями, углеводами, флавоноидами, дубильными веществами, эфирными маслами), а также свойствами янтарной кислоты, стимулирующей клеточное дыхание и выполняющей универсальную функцию синтеза энергии на клеточном уровне [6].
Материал и методы исследований. Работа проводилась в отделе фармакологии ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии». Экспериментальные опыты были проведены в соответствии с требованиями к врачебно-биологическому эксперименту по подбору аналогов, постановке контроля, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания животных в период проведения работы и учета результатов [10]. Общетоксические свойства кормовой добавки ЛОЗЕКОРМ оценивались путем определения острой и субхронической токсичности согласно «Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2005), при соблюдении правил, предусмотренных «Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, которые используются с экспериментальной и научной целью» (ETS № 123, Страсбург, 18.03.1986). Эксперименты выполнялись на белых нелинейных крысах обоего пола, которые содержались в условиях вивария.
Токсикометрическую оценку в остром опыте проводили путём однократного введения образца кормовой добавки непосредственно в полость желудка крыс со средней массой тела 215±6,0 г с помощью атравматичного зонда в максимальных для внутреннего введения дозах (5,0 мл). Животным контрольной группы вводили физраствор в максимальном объеме (табл.1).
Таблица 1 – Схема опыта по определению острой токсичности
кормовой добавки ЛОЗЕКОРМ на белых крысах
| Группа | Метод введения | Доза и объем введения |
| 1 (опытная)n = 10 | Внутрижелудочно с помощью атравматичного зонда | 5,0 мл на животное |
| 2 (контроль)n = 10 | Внутрижелудочно с помощью атравматичного зонда | физраствор в тех же дозах |
Параметры субхронической токсичности изучали по общепринятым методикам на белых лабораторных крысах [9]. Кормовую добавку ЛОЗЕКОРМ вводили перорально ежедневно натощак в течение 28 дней по непрерывной схеме в трех дозах, руководствуясь результатами, полученными при исследовании острой токсичности. При ежедневных наблюдениях учитывали клинические показатели: общее состояние, аппетит, показатели дыхания, пульса, температуры тела, функции органов пищеварения и мочеотделения, динамику прироста массы тела. Взвешивание животных осуществляли в начале опыта, через 14 дней и по его окончанию. Кровь для исследований брали на 30 сутки экспериментального периода.
Биохимические исследования крови проводили на автоматическом химическом анализаторе – Vitalab Selectra Junior (Нидерланды) с использование реактивов фирмы ELITech Clinical Systems (Франция) и Аnalyticon biotechnologies AG (Германия). Статистическая обработка результатов проводилась с использованием пакетов статистических программ ARCADA, Microsoft Excel ХР и Statistical for Windows. Исследование количественных признаков оценивалось методом сравнения средних значений двух выборочных совокупностей с определением критерия Стьюдента и уровня значимости (p).
Результаты исследований. Установлено, что за весь период наблюдения в остром эксперименте (14 дней) гибели животных в опытной группе зарегистрировано не было, различий в поведении и состоянии подопытных и контрольных крыс не установлено. Рефлексы, координация движений, физиологические параметры сердечного и дыхательного ритмов оставались без изменений. По шкале изменения активности крыс в токсикологическом эксперименте, подопытные животные соответствовали значению «нормальное» (5/+++++/).
Таким образом, данные токсикометрии, а также наблюдения за лабораторными крысами в постинтоксикационном периоде острого отравления, по ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества» позволили отнести кормовую добавку ЛОЗЕКОРМ к 4-му классу опасности (вещества малоопасные), для которых диапазон доз LD50 при внутрижелудочном введении в опытах на крысах составил более 5000 мг/кг.
Принимая во внимание невозможность определения летательных доз кормовой добавки (в остром опыте среднесмертельная доза (LD50) установлена не была, отправным моментом для выбора дозировок при проведении субхронической токсичности явился максимальный объем, использованный при однократном введении (5,0 мл).
Эксперименты по определению субхронической токсичности кормовой добавки ЛОЗЕКОРМ проводились на белых нелинейных половозрелых крысах со средней массой тела 175,8±1,47 г, из которых по принципу парных аналогов было сформировано 4 группы – по 10 особей в каждой. Схема опыта представлена в таблице 2.
Таблица 2 – Схема опыта при определении субхронической токсичности кормовой добавки ЛОЗЕКОРМ на лабораторных крысах (n = 10)
| Группы | Доза препарата |
| 1 опытная | 1/5 – 1,0 мл/животное |
| 2 опытная | 1/10 – 0,5 мл/животное |
| 3 опытная | 1/20 – 0,25 мл/животное |
| 4 контрольная | 0,9% раствор натрия хлорида в эквиобъеме 1 группы и в том же режиме дозирования |
Изучаемый образец кормовой добавки ЛОЗЕКОРМ крысам задавали перорально в течение 28 дней один раз в сутки индивидуально, предварительно смешивая с небольшим количеством воды. Контрольная группа получала физиологический раствор в эквиобъеме 1 группы и в том же режиме дозирования.
В результате постоянных наблюдений установлено, что длительное применение кормовой добавки ЛОЗЕКОРМ в субтоксических дозах не приводит к гибели животных, а также не вызывает изменений в их поведенческих реакциях и двигательной активности. При исследовании шерстного покрова выпадения шерсти, алопеций, изменения цвета и структуры не установлено. У опытных животных в сравнении с интактной группой не выявлено изменений и достоверных различий в показателях ритма дыхания, частоты сердечных сокращений и температуры тела, которые не выходили за границы видово-возрастной нормы для взрослых здоровых крыс.
Отклонений в функциях пищеварения и мочеотделения отмечено не было: фекальные болюсы были оформлены, коричневатого цвета, нормальной консистенции; отсутствовали изменения в цвете и объеме мочи.
Применение кормовой добавки ЛОЗЕКОРМ не оказало отрицательного влияния на динамику прироста массы тела, так как животные всех опытных групп набирали массу с той же скоростью, что и здоровые крысы контрольной группы. Наиболее высокий показатель был установлен в первой опытной группе (14 %). В двух других опытных группах он составил 12,1 % (вторая) и 12 % (третья), а в контроле – 9,2 %.
Возможное токсическое влияние образца кормовой добавки ЛОЗЕКОРМ на организм животных оценивали при биохимических исследованиях крови крыс, участвующих в эксперименте (табл. 3).
Таблица 3 – Влияние кормовой добавки ЛОЗЕКОРМ на показатели крови крыс в субхроническом опыте (М±m; n=5)
| Показатели | Группы животных | |||
| 1-я опытная | 2-я опытная | 3-я опытная | контрольная | |
| Общий белок, г/л | 73,26±0,88 | 71,46±0,86 | 71,06±1,03 | 72,68±1,14 |
| Глюкоза, мМ/л | 12,64±0,57 | 13,12±0,82 | 11,97±0,76 | 11,94±0,53 |
| Мочевина, мМ/л | 8,1±0,27 | 7,6±0,23 | 8,2±0,38 | 7,9±0,39 |
| Холестерин, мМ/л | 2,21±0,08 | 2,02±0,12 | 1,96±0,09 | 1,83±0,08 |
| АсАТ, ЕД/л | 85,4±5,91 | 88,6±6,48 | 80,8±3,90* | 91,6±2,73 |
| АлАТ, ЕД/л | 50,6±3,31 | 53,8±5,22 | 57,8±3,12 | 56,8±3,03 |
| ЩФ, ЕД/л | 331,8±24,42*** | 383,6±10,38* | 393,8±7,19* | 423,4±11,68 |
| Триглицериды, мМ/л | 0,72±0,03** | 0,60±0,02*** | 0,60±0,03** | 0,47±0,03 |
Достоверность по отношению к контрольной группе –* р≤0,05; ** р≤0,01; *** р≤0,001
Оценка комплекса биохимических показателей крови крыс выявила увеличение содержания глюкозы в первой и второй опытных группах – на 5,9 % и 9,9 %, что позволяет говорить о стимулирующем влиянии компонентов добавки (янтарная кислота) на углеводный обмен.
Под влиянием добавки выявлено снижение уровня гепатоиндикаторных ферментов – АлАТ и АсАТ, которое отмечено во всех опытных группах, в сравнении с контролем – на 7,3 % и 3,4 % и 13,4 % (р≤0,05).
Показатель АлАТ у контрольных крыс превышал концентрацию фермента у животных, получавших образец кормовой добавки ЛОЗЕКОРМ на 12,3 % (первая опытная группа) и 5,8 % (вторая опытная группа). В третьей опытной группе значимой разницы не установлено. В опытных группах зафиксировано достоверное снижение активности ЩФ: на 27,6 % (1-я группа); 10,3 % (2-я группа) и 7,5 % (3-я группа).
Влияние кормовой добавки на липидный обмен опытных крыс проявилось в достоверном увеличении содержания триглицеридов на 53,2 % (1-я группа) и 27,7 % (2-я и 3-я группа) относительно контроля.
Выводы. Выполненные исследования показали, что кормовая добавка ЛОЗЕКОРМ относится к группе малоопасных веществ (4 класс опасности). Ее однократное применение в максимальной дозе, а также длительное применение в субтоксических дозах не оказывает отрицательного влияния на общее состояние лабораторных животных, их клинический статус, показатели гомеостаза крови, что позволяет использовать данную кормовую добавку в пчеловодстве без специальных режимов и ограничений.
Литература:
- Березовская И.В., Гуськова Т.А., Дурнев А.Д. Методические рекомендации по изучению безопасности воспроизводства лекарственных препаратов. Биомедицина. – 2011. – № 3.
- Ланец О.В. Семененко М.П., Рудь Е.Н. Определение параметров токсичности нового препарата при длительном воздействии на организм крыс. Сборник научных трудов Краснодарского научного центра по зоотехнии и ветеринарии, – 2020. Т. 9.№ 1.
- Ляпунов Н.А., Безуглая Е.П. Современная методология фармацевтической разработки лекарственных препаратов. Фармацевтическая отрасль, – 2013. – № 1 (36).
- Кузьминова Е., Семененко М., Фонтанецкий А. Лечебно-профилактические премиксы. Животноводство России, – 2008. – № 1.
- Кузьминова Е.В., Антипов В.А., Семененко М.П. Изучение токсических свойств препаратов бета-каротина В сборнике: Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье животных. Материалы международной научно-практической конференции, – 2004.
- Онищук Ф.Д. Способ повышения иммунитета пчел. Патент РФ №2018131649. – 2018.
- Рогалева Е.В., Семененко М.П., Гринь В.А., Кузьминова Е.В. Теоретические и экспериментальные аспекты создания комплексных лекарственных средств на основе сырья природного происхождения. Сборник научных трудов Краснодарского научного центра по зоотехнии и ветеринарии, – 2020. – Т. 9. № 2.
- Соловьева Л.Ф. Применение хвойного экстракта в пчеловодстве. Санкт-Петербург, «Нордмедиздат»,2012-20 с.
- Хабриев Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Р.У. Хабриев. – М.: ОАО «Издательство «Медицина». – 2005.
- Jacobs A. C., Hatfield K. P. History of Chronic Toxicity and Animal Carcinogenicity Studies for Pharmaceuticals. Veterinary Pathology. – 2013. – 50(2).
- Yousefi N., Mehralian G., Rasekh H.R., Yousefi M. New Product Development in the Pharmaceutical Industry: Evidence from a generic market. Iran J Pharm Res. – 2017. – 16(2).
EVALUATION OF THE HARMLESSNESS OF A NEW FEED ADDITIVE FOR BEES LOZEKORM
M.P. SEMENENKO1, F.D. ONISCHUK1, E.V. KUZMINOVA1
Krasnodar Research Center for Animal Husbandry and Veterinary Medicine
Experimental studies have shown that a single intragastric injection of a sample of LOZEKORM feed additive in doses of 5.0 ml to laboratory animals allows it to be classified as a 4th hazard class - low-hazard substances (GOST 12.1.007-76 “Harmful substances”). The results of the studies of the prolonged intragastric administration of the feed additive sample LOZEKORM in doses of 1.0 ml, 0.5 ml and 0.25 ml per animal did not reveal its toxic effect. At the same time, the feed additive has an indirect positive effect on growth characteristics and a number of biochemical parameters of the blood of laboratory animals.
Key words: feed additive, diseases of bees, harmlessness, preclinical studies, laboratory animals
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ: Семененко Марина Петровна, д-р вет. наук, доцент, 8-918-46-12-663, e-mail: sever291@mail.ru; Онищук Филипп Давидович, д-р биол. наук, профессор, 8-918-905-40-49, e-mail: phildaw@rambler.ru ; Кузьминова Елена Васильевна, д-р вет. наук, доцент, 8-918-41-98-369, e-mail: niva1430@mail.ru